Главная страница
qrcode

Правила забора материала для микробиологических исследований (кровь, гной, кал, моча, слизь из носоглотки, ликвор, мокрота). Правила забора материала, хранения и транспортировки при оои


НазваниеПравила забора материала для микробиологических исследований (кровь, гной, кал, моча, слизь из носоглотки, ликвор, мокрота). Правила забора материала, хранения и транспортировки при оои
Анкорpraknavyki mikra 16g.docx
Дата20.09.2017
Размер98.9 Kb.
Формат файлаdocx
Имя файлаpraknavyki_mikra_16g.docx
ТипПравила
#20940
страница1 из 6
Каталогid60133386

С этим файлом связано 51 файл(ов). Среди них: praknavyki_mikra_16g.docx, Методическое пособие по микробиологии.doc, Zanyatie_10.docx, Дополнительные методы исследования ссс.ppt.ppt, praknavyki_mikra.docx, Zanyatie9.docx, Аускультация сердца.Исследование сосудов..ppt.ppt и ещё 41 файл(а).
Показать все связанные файлы
  1   2   3   4   5   6



Перечень практических навыков


  1. Основные правила поведения в бактериологической лаборатории.

  2. Правила забора материала для микробиологических исследований (кровь, гной, кал, моча, слизь из носоглотки, ликвор, мокрота).

  3. Правила забора материала, хранения и транспортировки при ООИ.

  4. Составить направление на микробиологическое исследование.

  5. Дезинфекция в микробиологической лаборатории: рук, рабочего места, выделений больного, предметных и покровных стекол.

  6. Стерилизация лабораторной посуды, подготовка к стерилизации.

  7. Этапы приготовления мазка для иммерсионной микроскопии.

  8. Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов).

  9. Метод Грамма (назначение, основная окраска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная окраска; механизм).

  10. Окраска по Циль-Нильсену (назначение, основная окраска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная окраска; механизм).

  11. Окраска по Нейссеру (назначение, основная окраска, протрава, обесцвечивающий фактор, дополнительная окраска; механизм).

  12. Методы определения подвижности бактерий (микроскопические и бактериологические).

  13. Механические и биологические методы выделения чистых культур аэробных и факультативно-анаэробных бактерий.

  14. Метод Дригальского, назначение (1- 4 этапы).

  15. Методы создания анаэробных условий (механические, физические, химические и биологический).

  16. Этапы выделения чистых культур анаэробов ( 1 – 5)

  17. Короткий «пестрый » ряд. Изменение короткого «пестрого» ряда при росте E.coli и S.typhi .

18. Идентификация бактерий посевом на триаду Хейберга.

19.Принципы определения каталазной и плазмокоагулазной активности бактерий .

20. Методы изучения протеолитической активности бактерий (реакции на индол, сероводород и др.)

  1. Вирусологические методы. Заражение куриного эмбриона в аллантоисную полость. Цель. Этапы заражения.

  2. РГА (реакция гемагглютинации). Назначение. Компоненты. Механизм.

  3. Методы индикации и титрования бактериофагов по Грациа и Аппельману.

  4. Реакции фаголизиса. Идентификация возбудителей дизентерии. Компоненты, механизм, учет реакции.



  1. Реакция фаготипирования St. аureus. Назначение, ингредиенты, учет реакции.

  2. ПЦР, принцип метода. Назначение, ингредиенты, достоинства.

  3. Этапы получения рекомбинантных молекул (векторы, рестриктазы).

  4. Определение антибиотикочуствительности бактерий методами «бумажных дисков» и серийных разведений.

  5. Бактериологическая диагностика дисбактериоза кишечника.

  6. Определение общего микробного числа воздуха по методам Коха и Кротова.

  7. Определение фекального загрязнения воды по коли-индексу.

  8. Заражение экспериментальных животных (биологический метод). Цель, принцип метода.

  9. Методы выявления факторов вирулентности бактерий: адгезивности, капсулообразования, антигенов-ингибиторов фагоцитоза.

  10. Методы выявления факторов патогенности ( токсигенности, альфа-, бета-, гамма-, энтеро- и тиолзависимых гемолизинов).

  11. Методы выявления факторов вирулентности - ферментов агрессии бактерий: лизоцима, гиалуронидазы, лецитовителлазы и др.

  12. Методы определения персистентных свойств бактерий: антилизоцимной, антикомплементарной и антиинтерфероновой активности.

  13. РА на стекле. Назначение. Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  14. РА Вейгля (назначение, компоненты, механизм, недостатки, учет реакции).

  15. РА Райта (назначение, компоненты, механизм, недостатки, учет реакции).

  16. РА Видаля (назначение, компоненты, механизм, недостатки, учет реакции).

  17. РПГА (определение напряженности поствакцинального протифодифтерийного антитоксического иммунитета). Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  18. РПГА (определение напряженности противоскарлатинозного

антитоксического иммунитета). Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  1. РП по Асколи (назначение, компоненты, механизм, учет реакции).

  2. РН токсина антитоксином по Оухтерлони (назначение, компоненты, механизм, недостатки, учет реакции).

  3. РСК по Борде-Жангу (назначение, компоненты, механизм, учет реакции).

  4. РСК Вассермана (назначение, компоненты, механизм, учет реакции).

  5. РИТ - реакция иммобилизации бледной трепанемы. Назначение, ингредиенты, механизм, учет реакции.

  6. Опсонофагоцитарная реакция. Серологическая диагностика бруцеллеза (in vitro). Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  7. РН на мышах с целью установления токсигенности Cl.Perfringens. Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  8. РН на мышах с целью идентификации вируса клещевого энцефалита. Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  9. РТГА (определение серотипа вируса гриппа А). Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  10. РИФ (экспресс-диагностика и серологическая диагностика гриппа А). Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  11. ИФА(конкурентный способ) определение HBs-АГ вируса гепатита В. Компоненты. Механизм. Учет реакции.

  12. ИФА (непрямой способ),серологическая диагностика СПИДа Компоненты. Механизм.

  13. Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции с помощью реакции иммуноблотинга. Компоненты. Механизм Учет реакции.



1)правила поведения в баклаюораториях

  1. В помещение лаборатории нельзя входить без специальной одежды: халата, тапочек, сменной обуви,

  2. В лабораторию нельзя вносить посторонние вещи, запрещается курить и приносить пищу.

  3. При распаковывании заразного материала необходимо соблюдать осторожность: пробирки снаружи обтирать дезинфицирующим раствором: переливание жидкостей, содержащих патогенные микробы, производят над сосудом, содержащим дезинфицирующий раствор.

  4. Если разбилась посуда. Содержащая заразный материал (пробирка, чашка Петри),  немедленно производится обеззараживание предметов, ©дежды, стола и помещения.

  5. После окончания работы дезинфицируют руки и поверхность рабочего стола.

  6. Музейные культуры микробов ставят на хранение в холодильник, закрывают и опечатывают.

  7. Работники лаборатории подлежат обязательной вакцинации против тех инфекционных болезней, с возбудителями которых они работают. На кафедре микробиологии используются материалы, содержащие возбудителей III-IV групп, после разрешения председателя режимной комиссии Республиканской ГЭС.


2) Правила забора материала для микробиологических исследования

При заборе и работе с клиническим материалом персонал должен использовать перчатки и халат. Сроки доставки клинического материала в лабораторию должны быть сокращены до минимума.

Кровьдля посева следует брать до начала антибактериальной терапии; на высоте подъема температуры; у постели больного с соблюдением правил асептики. Посев производится в двойную и тиогликолевую среду в соотношении 1:10.

Мочадля посева берется до начала антибактериальной терапии. Моча здорового человека стерильна. От начала взятия пробы мочи до начала исследования в лаборатории должно проходить не более 1-2 часов.

Гнойполучают с помощью стерильного шприца или стерильного ватного тампона.

Испражненияна патогенные энтеробактерии берут ректальными петлями, смоченными консервантом, и помещают в пробирку с консервирующей средой.

Слизь из носоглотки (на дифтерию) забирают стерильным тампоном натощак. Тампон помещают в стерильную пробирку и доставляют в лабораторию не позже 2-3 часов с момента забора материала.

Спинно-мозговую жидкостьполучают в результате люмбальной пункции. 3-5 мл ликвора помещают в пробирку (при транспортировке предохранять от охлаждения).

Мокротусобирают натощак после ополаскивания рта в стерильную посуду
3)Правила забора материала, хранения и транспортировке при ООИ

К особо опасным инфекциям прежде всего относится чума. При постановке предварительного диагноза «чума» в лаборатории проводятся срочные мероприятия:

1.  Немедленно сообщают 8 вышестоящие органы здравоохранения,

2.  На лабораторию накладывается карантин, т.е. ни один лабораторный работник, контактировавший с заразным материалом, не должен покидать помещения лаборатории до прибытия эпидемиолога.

3.  Все материалы: от больных, чистые культуры и павшие животные должны быть направлены в специализированные лаборатории для окончательного  установления диагноза.

Меры безопасности при транспортировке

Материал помещают в банки с плотно закрывающейся пробкой, обвязывают пергаментом(т.е. водонепроницаемым материалом), затем обвертывают салфетками, смоченными 5% раствором лизола или фенола. В таком виде банки с материалом помещают в металлические биксы. На банки с материалом наклеивают этикетки. Все надписи на этикетке делают простым графитным карандашом, г.к. надписи чернилами смываются при дезинфекционной обработке.

4. После отправки материала проводят заключительную дезинфекцию.

Культуру автоклавируют при температуре 120 ЯС в течение 1 часа.

Стеклянную лабораторную посуду обеззараживают в 3% растворе хлорамина или карболовой кислоты 1 сутки, а затем кипятят в 1% растворе бикарбоната натрия.

Трупы животных автоклавируют, заливают 10% раствором лизола на сутки и закалывают в специально вырытую яму.

Кожу открытых частей тела обрабатывают 70% раствором спирта.
4)составить направление на мб исследование

Направление на исследование является сопроводительным документом, который прилагается к инфекционному материалу, предназначенному для лабораторных исследовании.

Составляется  по следующей форме:

1.  название материала

2.  учреждение, направляющее материал

3. фамилия, имя отчество больного

4. возраст

5. адрес больного

6. дата заболевания

7. дата взятия материала

8. предполагаемый клинический диагноз

9. подпись врача, направляющего материал

Поступивший в лабораторию инфекционный материал  регистрируется в специальном журнале.
5)Дезинфекция в микробиологической лаборатории

Дезинфекция- это обеззараживание объектов окружающей среды с помощью химических веществ, обладающих антимикробным действием.

Цель дезинфекции- предупредить передачу возбудителей от инфицированного организма неинфицированному.

В микробиологический лаборатории используют:

1. хлорную известь (0,1 — 10% раствор);

2.  хлорамин (0.5 -5% раствор), для дезинфекции рук 0,25 — 0,5% раствор, для дезинфекции предметов ухода за больными при кишечных и воздушно-капельных инфекциях 1-3% раствор, при туберкулезе — 5% раствор;

3.  фенол (карболовая кислота) в виде 3 — 5% раствора для дезинфекции помещений;

4.  лизол (3 — 5% раствор);

5.  биглюконатхлоргексидина (гибитан), для дезинфекции рук 0,5% раствор, для дезинфекции помещений 0,1% раствор;

6.  дихлорид ртути (сулема) — иногда используют для дезинфекции предмете ухода за больными. Препарат высокотоксичен, всасывается через кожу.
6)Подготовка посуды к стерилизации

В бактериологических и вирусологических лабораториях используют обычную лабораторную посуду: цилиндры, колбы, склянки для растворения и хранения реактивов, химические пробирки. Помимо этого используют специальную посуду:

Пробирки

• биологические- с крупным дном, неразвернутым краем;

• центрифужные- сужены книзу, конической формы;

• преципитацию иные- очень узкие с внутренним диаметром 2-3 мм Стеклянные чашкиПетри для выращивания микроорганизмов на плотных питательных средах. Их изготавливают из прозрачного стекла, не имеющего камней, пузырей. Высота чашки 20-30 мм, диаметр 60-200 мм

Пипетки

• градуированные должны соответствовать параметрам ГОСТа

• пастеровские-  стеклянные трубки диаметром 5-7 мм, у которых один конец оттянут над пламенем горелки в виде капилляра

Специальная лабораторная посуда должна быть чистой и стерильной. Мытье производят ершами с мылом и содой. Новую посуду следует до мытья прокипятить в 1-2% растворе хлористоводородной кислоты. Сушат посуду в сушильном шкафу

Сухую посуду закрывают и помещают в пеналы. В пробирки вставляют ватные пробки и заворачивают в пачки по 5-10 штук. К чашкам Петри подбирают крышки и завертывают по одной или несколько штук. Пипетки закрывают ваткой с того конца, который берут в руки. Готовые пипетки заворачивают в бумагу и укладывают в пеналы. Стерилизация проводится в сухожаровом шкафу при температуре 180°С в течение 1 часа.
7)Этапы приготовления мазка

Для приготовления мазка необходимо иметь:

•     Чистое обезжиренное предметное стекло.
•     Бактериологическую петлю
•     Культуру, выращенную на плотной питательной среде — агаре, или жидкой среде — бульоне.
•     Спиртовку.
•     Набор красок.

1. Обезжиренное предметное стекло и бактериологическую петлю прожигают в пламени горелки. Пробирку с изучаемой культурой держат  между указательным и большим пальцами левой руки. Петлю берут правой рукой, мизинцем правой руки прижимают пробку пробирки к ладони.

Если мазок готовится с жидкой питательной среды, то каплю культуры наносят петлей на предметное стекло.

Если мазок делают из культуры с агара, то петлю с культурой вносят на предметное стекло и добавляют каплю физиологического раствора, в котором эмульгируют внесенный материал.

Петлю обжигают в пламени горелки. Мазок должен быть тонким, равномерно растертым, округлой формы, размером 1,5-2 см.

2. Высушивание мазка производится при комнатной температуре.

3.  Фиксация мазка производится с целью:

• Убить микробные клетки.
• Обеспечить лучшее прилипание микробов к предметному стеклу.
• Облегчить дальнейшее окрашивание.

Фиксация мазка в пламени горелки производится 3-кратно, действие пламени должно длиться 2 секунды.

Для более нежной фиксации мазков крови, спирохет и простейших использующих химические фиксаторы:

•     Метиловый спирт в течении 5-и минут.
•     Этиловый спирт (96°) в течении 10-и минут.
•     Смесь Никифорова — в течении 10-15 минут.
•     Ацетон — в течении 5-и минут.
•   Пары формалина — в течении нескольких секунд.

4. Окраска препаратов проводится:

•     Простыми методами (водным фуксином Пфейффера, метиленовой синькой Леффлера), когда окрашивается вся клетка и используется только один краситель;
•    Сложными методам, когда определяются клеточные структуры,

После экспозиции мазок промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.
8)Основные правила микроскопии (микроскопия готовых препаратов)

Световой микроскоп — это обязательная принадлежность любой микробиологической лаборатории.  Разрешающая способность светового микроскопа 0,2 мкм. Общее увеличение микроскопа определяется произведением объекта на увеличение окуляра.

Микроскопия с сухими объективами дает увеличение в 120-600 раз. Недостаток: часть лучей отклоняется в сторону и не достигается

хорошее освещение изучаемого объекта. Иммерсионные объективы — это объективы, которые погружают в жидкости (кедровое масло, персиковое масло). Поскольку показатели преломления стекла и иммерсионного масла практически одинаковы 1,52 , сохраняется четкость и ясность поля зрения. Полезное увеличение микроскопа достигает 2000 раз. Современный микроскоп — это точный оптический прибор, поэтому необходимо строго соблюдать ряд правил при работе с ним:

1) использовать правильное освещение;

2) хранить закрытым от пыли;

3) для чистки оптических частей применять кисточку или мягкую ткань, смоченную водой или спиртом. Раз в год микроскоп должен просматривать мастер-оптик.
9)метод грамма

Метод Грама введен в 1884 году датским микробиологом Гансом ХристианомГрамом и является важным таксономическим признаком.

К грамположительным бактериям относятся те, у которых комплекс, образуемый генцианвиолетом и йодом, удерживается при обработке спиртом.

Грамотрицательными называют те бактерии, которые не обладают свойством удерживать комплекс и обесцвечиваются при обработке спиртом.

Способность или неспособность клеток удерживать комплекс генцианвеолета с йодом связывают с различным составом и структурой клеточной стенки бактерий.

Методика окраски.

1 .На фиксированный мазок накладывают фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят каплю воды на 2 минуты. Генцианвиолет основная краска.

2. Бумагу сбрасывают и, не промывая водой, наливают раствор Люголя на 1 минуту. Раствор Люголя протрава: усиливает действие основной краски у грамположительных бактерий.

3. Препарат обесцвечивают 3-5 каплями спирта в течение ЗОсекунд до прекращения отхождения фиолетовых струек краски. Спирт обесцвечивающий фактор.

4. Промывают водой.

5. Докрашивают водным фуксином Пфейффера в течение 1-2 минут. Водный фуксин дополнительная краска. Грамположитель-ные бактерии (кокки) сине-фиолетового цвета, грамотрицательные (палочковидные формы) розового цвета.

6. Промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и микроскопируют под иммерсией.
10) Метод Циль-Нильсена

Метод используется для окраски спор и кислотоустойчивых бактерий (микобактерии туберкулеза). Кислотоустойчивость связана с наличием в клеточной стенке мяколовых кислот. Метод Циль-Нильсена основан на использовании концентрированных красителей прогревания.
  1   2   3   4   5   6

перейти в каталог файлов


связь с админом