Главная страница
qrcode

Краткий курс


НазваниеКраткий курс
АнкорMetoda po mikre.doc
Дата30.11.2017
Размер0.68 Mb.
Формат файлаdoc
Имя файлаMetoda_po_mikre.doc
ТипДокументы
#28898
страница4 из 15
Каталогryazmeduniver

С этим файлом связано 83 файл(ов). Среди них: raspisanie_-_osen.pdf, Научно-практический семинар.doc, телесно-ориентированная.doc, Разрешение на прохождение практики (NB снизу пе...docx, 20 частых вопросов первокурсника.doc, Osen_1_lech_2012-2013_nov_plan_-36_gr.doc, коллок по шизе.doc, 1 марта в 17.docx и ещё 73 файл(а).
Показать все связанные файлы
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   15

Транспозируемые элементы - это отдельные фрагменты ДНК, способные к многократному перемещению от одного репликона к другому без изменения структуры. Они не способны к авто­номной репликации (удваиваются вместе с хромосомой и плазмидой), могут перемещаться (в со­ставе плазмиды) от клетки-донора в клетку-реципиент, вызывая изменение ее генотипа. Различают вставки - последовательности не кодирующие известных признаков, и транспозоны, кодирующие 1 или несколько признаков (любых). Перемещение, в зависимости от вида элемента, может происходить в разные или в определенный участок репликона, что также является важным механизмом изменчивости микробов.

Изменчивость микроорганизмов

Различают генотипическую (наследуемую) изменчивость и фенотипическую (ненаследуемую, модификационную). Наследуемая изменчивость осуществляется в виде мутаций и рекомби­наций.

Мутации - это перегруппировка генов, не связанная с внесением в клетку нового генетиче­ского материала, ненаправленное изменение генотипа. Спонтанные мутации возникают без види­мых причин, как ошибки репликации; индуцированные - под влиянием мутагенов (УФО, ионизи­рующей радиации, алкилирующих агентов, азотистой кислоты, аналогов оснований ДНК и др.). Мутации могут проявляться в виде удвоения, выпадения, замены нуклеотидов, вставки (в том чис­ле транспозируемого элемента) и др.

Рекомбинации - это изменения генотипа, связанные с внесением в клетку-реципиент гене­тического материала от клетки-донора. Различают 3 вида рекомбинаций: трансформацию, трансдукцию, конъюгацию.

Трансформацией называют процесс: поглощения клеткой-реципиентом

изолированной ДНК клетки-донора (или синтетической нуклеиновой кислоты).

Трансдукция - перенос генетической информации (ДНК) при проникновении в клетку уме­ренного бактериофага (вирусных частиц, паразитирующих на бактериальных клетках).

Конъюгация - перенос генетической информации посредством трансмиссивных плазмид при непосредственном контакте донора и реципиента.

Мутации и рекомендации обеспечивают высокий уровень генетического обмена в различных микробиоценозах, позволяют микробам быстро адаптироваться к меняющимся условиям среды, эволюционировать, нередко приобретая нежелательные свойства - лекарственную устойчивость, повышенный патогенный потенциал. Все формы наследуемой изменчивости активно используют­ся в генно-инженерных исследованиях и биотехнологии.

БАКТЕРИОФАГИ

БАКТЕРИОФАГИ - вирусы бактерий, которые обладают способностью лизировать бактери­альную клетку или изменять ее свойства. Фаги размножаются в клетках чувствительных к ним бактерий.

Строение фага кишечной палочки (Т2)

Средние размеры фагов - 25-110 нм.

По характеру взаимодействия с чувствительной клеткой фаги различают:

а) вирулентные (дают литическую продуктивную инфекцию);

б) умеренные (вызывают лизогенизацию клетки).
По специфичности различают:

а) полифаги (лизируют несколько видов бактерий);

б) монофаги (лизируют только один вид бактерий);

в) типовые фаги (лизируют не все штаммы данного вида, а лишь некоторые, принадлежащие к одому фаговару).

Этапы взаимодействия вирулентного фага с клеткой:

  1. Адсорбция фага на специфических рецепторах клеточной стенки (с участием фибрилл и отростка).

  2. Проникновение нуклеиновой кислоты фага внутрь бактериальной клетки (лизоцим отрост­ка фага растворяет клеточную стенку бактерии в месте адсорбции, чехол сокращается, стержень проходит сквозь клеточную стенку и нуклеиновая кислота фага поступает внутрь бактериальной клетки, оболочка головки остается снаружи).

  3. Синтез в клетке компонентов фага (проникшая нуклеиновая кислота фага вызывает пол­ную перестройку метаболизма клетки; на рибосомах синтезируются белки фага, а в других участ­ках клетки реплицируется его нуклеиновая кислота).

  4. Сборка фаговых частиц и лизис клетки (нуклеиновая кислота наполняет белковые головки пристраивается отросток; лизоцим фага растворяет клеточную стенку бактерии, клетка лизируется, и из нее выходят 100-300 новых фагов; они внедряются в соседние клетки и также лизируют их; в результате мутная культура бактерий на жидкой среде просвегляется, а на плотной среде образует­ся колония фага - "стерильное пятно").

Взаимодействие умеренного фага с клеткой

Адсорбция фага и проникновение нуклеиновой кислоты происходит аналогично. Но проник­шая в клетку ДНК фага встраивается в хромосому клетки, где может находиться в неактивном со­стоянии (под действием белка-репрессора) и наследоваться дочерними клетками после репликации хромосомы. Этот процесс называется лизогенизацией, а клетки, содержащие неактивный геном фага (профаг), называются лизогенными. Чтобы обнаружить в клетке профаг, надо подействовать индуцирующими агентами физическими (УФО, рентгеновскими лучами) или химическими. Они разрушают репрессор, с профага считывается информация, в клетке синтезируются компоненты фага и клетка лизируется. Этот процесс называется индукцией. В процессе лизогенизации может произойти конверсия фагом (изменение свойств бактериальной клетки). Так, если нетоксичную дизентерийную палочку (не продуцирующую экзотоксин) обработать умеренным дифтерийным фагом, некоторые клетки станут лизогенными и приобретут способность продуцировать экзоток­син.

Титрование фагов

Активность препарата фага определяется его титром. Титр фага - наибольшее его разведение, еще вызывающее лизис чувствительной культуры бактерий.

Фаги титруют следующими методами.

/. Титрование фага на жидкой среде

Готовят последовательные десятикратные разведения испытуемого фага в жидкой питатель­ной среде; 10-1, 10-2, 10-3, и т.д. В эти разведения вносят чувствительную культуру бактерий. Про­бирки инкубируют в термостате при 37°С 18-20 часов. Затем отмечают наибольшее разведение фа­га, ещё вызывающее лизис внесённой культуры (рост бактерий в этой пробирке отсутствует). Это разведение, и является титром фага. Например: "титр фага - 10-6"

2. Титрование фага на плотной среде

Чашку с плотной средой делят на несколько зон. Культуру чувствительных бактерий высева­ют сплошным газоном на поверхность среды. Затем в соответствующие зоны наносят по капле различных десятикратных разведений фага. После инкубации в термостате при 37°С 18-20 часов отмечают наибольшее разведение фага, ещё вызывающее лизис (образование "стерильного пят­на").

Практическое применение фагов.

I. Вирулентные фаги применяют:

1) для лечения и экстренной профилактики (при угрозе заражения).
Например:

  • брюшнотифозный

  • дизентерийный

  • холерный Эль-Тор,

  • коли - протейный,

  • стафилококковый,

  • гангренозные,

  • синегнойный и др.

  1. для диагностики (с целью установления вида неизвестного микроба). Например: испы­туемый микроб высевают сплошным газоном на чашку с плотной средой, на которую наносят кап­лю известного видового фага и инкубируют в термостате. Если культура бактерий соответствует данному фагу, образуется "стерильное пятно".

  2. для фаготипирования с целью установления источника заражения (применяются типовые фаги). Если штаммы, выделенные от больного и предполагаемого источника лизирутотся одними и теми же типовыми фагами (принадлежат к одному фаговару), это подтверждает общность их про­исхождения.

Применение умеренных фагов:

  1. на лизогенных бактериях изучают механизмы функционирования различных генов; с по­мощью трансдукции устанавливают локализацию генов на бактериальной хромосоме.

  2. лизогенные бактерии ипользуются при поисках противоопухолевых веществ: если препа­рат обладает индуцирующими свойствами, т.е. он взаимодействует с нуклеиновыми кислотами, и его можно испытывать как противоопухолевый препарат.

  3. лизогенные штаммы используют при изучении различных мутагенных факторов, напри­мер, в космических исследованиях - как индикаторы надежности защиты космических кораблей от жестких космических лучей: если по возвращению из космоса произошла индукция, и культура лизировалась, следовательно в корабль проникли космические лучи, т.е. защита корабля ненадеж­на.

  4. умеренные фаги широко используются в генной инженерии. Модель "профаг - клетка" ле­жит в основе вирусогенетической гипотезы происхождения опухолей

МОРФОЛОГИЯ И ФИЗИОЛОГИЯ ГРИБОВ, АКТИНОМИЦЕТОВ, СПИРОХЕТ И ПРОСТЕЙШИХ

Грибы - это одноклеточные или многоклеточные эукариоты без хлорофилла, но близкие к растениям. Патогенные для человека грибы имеют следующие морфологические формы:

1 - гифы (нити), которые при сплетении образуют мицелий (тело гриба).
Различают:

а) истинный (у плесеней) - трубка, разделённая или неразделённая перегородками (септами),
покрытая общей оболочкой;

б) ложный (псевдомицелиий у грибов рода Кандида - Candida) вытянутые, нитевидные клетки, каждая из которых имеет свою оболочку.

  1. - круглые и овальные почкующие клетки (у дрожжей и грибов рода Кандида). Размеры ве­гетативных форм - xl - х100 мкм. Структура их сложная: многослойная клеточная стенка, цитомембрана, дифференцированное ядро, полисомы, митохондрии, включения, пигменты.

  2. - споры (по назначению и свойствам они отличаются от спор бактерий: у грибов это форма размножения и распространения; споры гриба менее устойчивы к высокой температуре).

Различают:

а) эндоспоры, покрытые оболочкой. Например, аски у дрожжей, образующиеся в результате полового размножения;

б) экзоспоры; контактируют с воздухом. Например, микроконидии у гриба (Penicillium).
Способы размножения грибов:

  1. - поперечное деление;

  2. - фрагментация;

  3. - почкование;

  4. - спорообразование;

  5. - половой способ.

По типу дыхания грибы - аэробы и факультативные анаэробы, по типу питания - гетеротрофы. Для выращивания грибов применяют среду Сабуро (дрожжевой экстракт + глюкоза + пептон + агар-агар) рН=6,8

Сроки роста - от 2-3 дней до месяца. Характер колоний различен: беловато-желтые, напоми­нающие капли сметаны, пушистые, морщинистые, гипсовидно-мучнистые, кожистые, с различны­ми бороздками, пигментами. По отношению к питательной среде различают 3 вида мицелия: воз­душный (репродуцирующий), на концах которого располагаются споры, и субстратный, врастающий в питательную среду и мицелий распространения.

Среди патогенных грибов известны диморфные грибы. Это грибы разной морфологии в зави­симости от локализации: в организме человека это обычно дрожжевая форма, а на среде Сабуро - мицелиальная. К ним относятся возбудители особо опасных микозов: гистоплазмоза, кокцидиоидного микоза и других заболеваний.

Токсинообразование: большинство грибов образуют эндотоксин, некоторые - экзотоксин. Грибы по строению мицелия подразделяют на две группы.

1. Низшие грибы (мицелий несептированный). Для медицины и фармации важны 2 класса:

  • зигомицеты (вызывают болезни лекарственных растений);

  • оомицеты (например, мукоровая плесень - вызывает мукоз у людей и животных).

2. Высшие грибы (мицелий септированный). Например грибы рода (Penicillium).
По характеру размножения грибы подразделяют на две группы:

- совершенные грибы (характерен половой способ размножения);

а) - аскомицеты

б) - зигомицеты

- несовершенные грибы - дейтеромицегы (половой способ невыявлен):
а) грибы рода Кандида, вызывающие заболевания у человека

Значение грибов:

  1. Патогенные грибы вызывают у человека микозы.

  2. Грибы широко используются в промышленной микробиологии как продуценты антибио­тиков (Penicillium), белков, полисахаридов, витаминов, ферментов; в пищевой промышленности (хлебопечение, сыроварение, изготовление кисломолочных продуктов)

  3. Грибы используют в биотехнологии и генной инженерии как объекты с помощью кото­рых получают необходимые вещества, препараты и др.

Методы изучения морфологии грибов:

1 .В неокрашенном состоянии, в "раздавленной капле" ее щёлочью.

Щелочь растворяет жир и ороговевшие клетки, после чего можно рассмотреть структуру и элементы грибов в пораженных тканях.

  1. В окрашенном состоянии в чистой культуре (красят чаще простым способом).

  2. В окрашенных и неокрашенных гистологических срезах.

  1. В люминесцентном микроскопе после обработки флюорохромами, используя вторичную люминесценцию.

Актиномицеты - это прокариоты, относящиеся к бактериям и составляющие самостоятель­ную группу микроорганизмов. Основные свойства (форма, строение, размножение, культивирование, чувствительность к антибиотикам) сближает их с бактериями. Но есть свойства (мицелий, размножение при помощи спор, характер заболевания - актиномикоза), сближающие с грибами. Значение для человека:

  1. Многие актиномицеты являются продуцентами антибиотиков.

  2. Патогенные актиномицеты вызывают у человека актиномикоз. Заразиться можно от жи­вотных и при жевании травинок, колосков (актиномицеты являются свободно живущими микро­бами) Возможен эндогенный путь инфицирования тканей (возбудитель живет в десневых карманах здоровых людей). Чаще развивается актиномикоз шейно-челюстной области, что приводит к обра­зованию воспалительных уплотнений со свищами, из которых выделяется жидкий гной с зерныш­ками - друзами (это скопление актиномицетов, окруженные колбовидными вздутиями клеток пара­зита). Обнаружение друз - диагностический признак актиномикоза.

Сиирохеты - это прокариоты, относящиеся к бактериям. Спирохеты имеют следующие осо­бенности:

  1. Форма - извитая, как у спирилл.

  2. Строение: имеется податливая клеточная стенка, цитомембрана, нуклеоид, миофибриллы.

  3. Размножение - поперечным делением.

  4. Имеют черты, сближающие их с простейшими:

а) передвижение происходит при помощи миофибрилл, что обеспечивает их движение - поступательное, сгибательное, вращательное, маятникообразное

б) окрашивание по Романовскому-Гимзе;

в) заболевание по характеру течения напоминает протозойные (вызванные простейшими);

г) сходные механизмы заражения (в том числе наличие переносчиков - членистоногих);

д) чувствительны к антибиотикам и к препаратам, применяемым для лечения протозойных заболеваний.

Спирохеты Гр-. По типу питания - гетеротрофы. По типу дыхания боррелии и трепонемы - анаэробы, а лептоспиры - аэробы. Патогенные спирохеты относятся к 3 родам:

1. Род Боррелия (имеют 3-5 неравномерных завитков):

а) возбудитель эпидемического вшивого возвратного тифа (B.recurrentis);

б) возбудители клещевых возвратных тифов - (B.caucasica). Культивируется плохо (на культурах тканей, на средах с сывороткой и кусочками тканей)

2. Род Трепонема (имеют 8-12 равномерных завитков, в виде пружины):

а) возбудитель сифилиса - (бледная трепонема), T.pallidum. Культивируется в яичке кролика.

3. Род Лептоспира (имеют множество мелких завитков; концы загнуты и имеют утолщения).

Патогенные лептоспиры относятся к виду L.interrogans. Культивируются на среде Уленгута (водопроводная вода + 30% кроличьей сыворотки).

Морфологию спирохет обычно изучают в неокрашенном состоянии, наблюдая подвижность в ультрамикроскопе или в окрашенном состоянии (чаще по Романовскому-Гимзе).

Простейшие - это эукариоты, близкие к животным клеткам. Размеры от 4 до 200 мкм. Форма - округлая, овальная, полулунная, грушевидная и т.д. У некоторых простейших тело покрыто отно­сительно тонкой мембраной (амёба), у других - более плотной эластичной оболочкой - пелликулой (балантидии), у жгутиковых - перипластом (пелликула + слой продольных фибрилл). В цитоплазме располагаются 1, иногда 2 ядра (микро- и макронуклеусы балантидии), полисомы, митохондрии, включения, вакуоли и др. У некоторых в цитоплазме лежит скелетная органелла - аксостиль. От­дельные простейшие имеют специальные органеллы: прикрепления (присоска у лямблий), проник­новения (у токсоплазм), пищеварения (у балантидии).

Движение простейших осуществляется с помощью:

  • псевдоподии (амеба);

  • жгутиков (лямблии)

  • ресничек (балантидии);

По типу питания - гетеротрофы. Среди них есть абсолютные паразиты (плазмодии, токсоплазмы и др.) В неблагоприятных условиях могут образовываться цисты - скопления из нескольких особей, покрытых общей оболочкой. По типу дыхания - большинство факультативные анаэробы.

Механизм питания:

  1. Всей поверхностью тела по типу фагоцитоза и пиноцитоза (амеба).

  2. Посредством специальных органелл пищеварения (балантидии). Простейшие чувствительны к дезинфицирующим растворам (цисты более устойчивы). Для многих простейших характерна стадийность развития, переход от одного хозяина к другому, причем в организме определенных хозяев проходит половой цикл развития. Размножение осуществляется:

  • простым делением (амеба);

  • множественным делением (шизогония у плазмодия);

  • половым способом (конъюгация или копуляция).

  • Классификация простейших:

1. Класс корненожек (возбудитель амебиаза др.).

2. Класс жгутиковых (возбудители трихомоноза, лямблиоза, лейшманиоза, сонной болезни и др.).

  1. Класс споровиков (возбудители малярии, токсоплазмоза, криптоспоридиоза и др.).

  2. Класс ресничные (возбудитель балантадиаза и др.). Морфологию простейших изучают:

  • в неокрашенном состоянии (в препарате «раздавленная капля» из свежего материала на по­догреваемом столике микроскопа).

  • в окрашенных препаратах (по Романовскому-Гимзе и др.).
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   15

перейти в каталог файлов


связь с админом