Главная страница
qrcode

Краткий курс


НазваниеКраткий курс
АнкорMetoda po mikre.doc
Дата30.11.2017
Размер0.68 Mb.
Формат файлаdoc
Имя файлаMetoda_po_mikre.doc
ТипДокументы
#28898
страница2 из 15
Каталогryazmeduniver

С этим файлом связано 83 файл(ов). Среди них: raspisanie_-_osen.pdf, Научно-практический семинар.doc, телесно-ориентированная.doc, Разрешение на прохождение практики (NB снизу пе...docx, 20 частых вопросов первокурсника.doc, Osen_1_lech_2012-2013_nov_plan_-36_gr.doc, коллок по шизе.doc, 1 марта в 17.docx и ещё 73 файл(а).
Показать все связанные файлы
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   15

СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ ОБЯЗАТЕЛЬНЫЕ (ПОСТОЯННЫЕ) СТРУКТУРНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ

Обязательными структурными элементами бактерий являются: цитоплазма с нуклеоидом и рибосомами, цитогтазматическая мембрана (ЦПМ), клеточная стенка.

Цитоплазма прокариотов в отличие от эукариотов не содержит митохондрий и хлоропластов, аппарата Гольджи, лизосом, эндоплазматической сети. Нуклеоид выполняет в клетке бактерий функцию ядра, т.е. является носителем генетической информации, однако, в отличие от ядра эукариотической клетки, он не имеет ядерной мембраны, не делится митозом. Нуклеоид состоит из замкнутой в кольцо нити ДНК. В генетическом отношении ДНК нуклеоида является единственной бактериальной хромосомой. В связи с этим бактерии имеют гаплоидный набор генов, контроли­рующих все их жизненно важные функции. Органеллы цитоплазмы выявляются при электронной микроскопии.

Цитоплазматическая мембрана ограничивает снаружи цитоплазму и состоит из тонкого слоя фосфолипидов и белка. Функции ЦПМ: получение энергии в результате биологического окисле­ния, участие в питании посредством активного транспорта веществ, участие в биосинтезе веществ, делении клетки. В состав ЦПМ входят окислительные ферменты, пермеазы, различные биосинтетические ферменты. ЦПМ выявляют при электронной микроскопии.

Клеточная стенка у Гр+ бактерии, как правило, содержит многослойный пептидогликан, который придает клеточной стенке прочность.

Клеточная стенка определяет форму бактерий, служит для механической защиты, участвует в питании за счет диффузии и осмоса. У Гр- бактерий клеточная стенка представлена тонким слоем пептидогликана, покрытого наружной мембраной, в состав которой входят белки, фосфолипиды и липополисахариды (ЛПС). Наружная мембрана клеточной стенки патогенных микробов во многом определяет специфичность их взаимодействия с организмом хозяина и помогает в распознавании близкородственных микробов. По компонентам и структуре клеточной стенки, биохимическим ме­ханизмам ее синтеза бактерии коренным образом отличаются от животных и растений. Поэтому лекарственные препараты, специфически воздействующие, например, на бактериальные стенки, безвредны для высших организмов. Клеточную стенку бактерий выявляют при электронной мик­роскопии, специальным окрашиванием или в опыте плазмолиза.

Необязательные (непостоянные) структурные элементы.

К ним относят; капсулу, спору, включения, жгутики, пили.

Капсула представляет собой поверхностно расположенное слизистое образование, которое по химической природе чаще является полисахаридом. Капсула выполняет защитную функцию, пре­дохраняя клетку во внешней среде от высыхания и других неблагоприятных факторов, а в орга­низме хозяина - от фагоцитоза, бактериолизиса и других реакций, лекарственных препаратов. Бак­терии, образующие капсулу в организме и на питательных средах, называют капсульными (например, клебсиеллы пневмонии). Некоторые бактерии образуют макрокапсулу только в орга­низме (золотистый стафилококк, стрептококк пневмонии, палочка сибирской язвы, возбудитель чумы, туляремии и др.). Многие бактерии образуют микрокапсулу: возбудитель коклюша, пато­генные энтеробактерии и др. Капсулу выявляют методом Бурри-Гинса: бактерии смешивают с ка­плей туши, распределяют их по стеклу виде тонкого мазка и фиксируют. После окрашивания раз­веденным карболовым фуксином в световом микроскопе на серо-коричневом (тушевом) фоне препарата видны красные тела бактерий, окруженные бесцветными зонами капсул.

Споры являются формой существования, предназначенной для сохранения бактерий во внешней среде. В одной бактериальной клетке в течение 12-18 часов формируется 1 спора, которая при благоприятных условиях за 4-6 часов прорастает в I вегетативную клетку. Спорообразующими являются, как правило, Гр+ палочковидные бактерии: те, у которых диаметр споры не превышает поперечный размер клетки, называют бациллами, те, у которых диаметр больше - клостридиями. Устойчивость спор к неблагоприятным физико-химическим воздействиям связана с наличием мно­гослойной оболочки, повышенным содержанием липидов, ионов кальция, магния, вода в связан­ном состоянии. Жизнеспособность спор при обычных условиях может сохраняться в течение деся­тилетий и столетий. Для уничтожения спор применяют методы стерилизации (пар под давлением, горячий воздух и др.). Споры окрашиваются плохо. Для выявления используют сложные методы окраски (по Циль-Нильсону, Ожешке и др.)

Включения. В клетках прокариотов можно обнаружить включения (скопления полисахари­дов, липидов, полифосфатов, серы). У дифтерийной палочки и некоторых других бактерий в цито­плазме обнаруживаются зёрна волютина (полифосфаты), выполняющие функцию запасного веще­ства (источника фосфора и энергии). Включения и цитоплазма по-разному окрашиваются одними и теми же красителями. Например, при окраске уксусно-кислым генцианвиолетом цитоплазма у дифтерийной палочки окрашивается в бледно-фиолетовый цвет, а расположенные по полюсам зер­на волютина - в темно-фиолетовый. Обнаружение зерен волютина имеет диагностическое значение.

Жгутики - являются поверхностными придатками бактериальной клетки, состоят из белка флагеллина и выполняет функцию движения. Наиболее подвижки микробы с 1 жгутиком - монотрихи (холерный вибрион) менее подвижны микробы с пучком жгутиков на одном из полюсов - лофотрихи (синегнойная палочка) или имеющие жгутики на обоих полюсах - амфитрихи; наименее подвижны перитрихи, у которых жгутики расположены по бокам или по, всей поверхности (мно­гие энтеробактерии). В световом микроскопе жгутики не видны. Для их выявления используют прямые методы: электронную микроскопию или специальное окрашивание, позволяющие увели­чить размеры жгутиков, например, за счет наслоения солей тяжелых металлов. С целью косвенного выявления жгутиков изучают подвижность микробных клеток. Для этого готовят нативные препараты (раздавленная или висячая капля), которые микроскопируют в затемненном поле зрения, темнопольном или фазовоконтрастном микроскопах.

Пили также являются поверхностными придатками бактериальной клетки и представляют со­бой тончайшие нити (тоньше и короче жгутиков), состоят из белка пилина. Функцией пилей являются прикрепление к субстрату; они также способствуют контакту клетки - донора с клеткой - реципиентом при конъюгации. Наличие пилей у патогенных микробов во многом определяет их способность вызывать заболевание, т.к. они необходимы для осуществления адгезии (прилипания). Прямое выявление пилей возможно только при электронной микроскопии.

Химический состав бактериальной клетки.

Основными веществами, входящими в ее состав являются: вода(свободная и связанная), нук­леиновые кислоты (ДНК и РНК), белки, углеводы, липиды и минеральные соли. Свободная вода, являясь универсальной дисперсионной средой, участвует в метаболизме, связанная вода - опреде­ляет устойчивость клетки к физическим факторам. Нуклеиновые кислоты являются носителями наследственной информации. Белки входят в состав различных структур бактериальной клетки, являются составной частью ферментов, токсинов, антигенов, определяют отношение к красителям, лекарственным и дезинфицирующим веществам. Углеводы являются источником энергии, и, наря­ду с белками, могут определять специфичность бактерий. Липиды определяют заряд клетки и про­ницаемость мембран, устойчивость к кислотам, щелочам, спиртам, а также токсичность микроба.

ДЕЙСТВИЕ ФИЗИЧЕСКИХ И ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВНА МИКРООРГАНИЗМЫ

Действие физических факторов

Высушивание губительно действует на микробы, однако разные виды обладают различной чувствительностью. Холерный вибрион гибнет через 48 часов. Возбудитель туберкулёза - через 70 дней. Длительно сохраняются микробы в высохших плёнках из гноя, крови или мокроты (месяцы). Высушивание практически не действует на споры. В процессе высушивания клетка лишается во­ды, происходит инактивация ферментных систем, наступает гибель микроба. Высушивание при­меняют в медицине: в сухом виде хранят лекарственное сырьё, многие лекарства. Широко приме­няется лиофильная сушка - высушивание из замороженного состояния в вакууме. В этом случае вода переходит из кристаллического состояния в парообразное, минуя жидкую фазу, жизнеспособ­ность микробов сохраняется; срок годности живых вакцин и других иммунобиологических пре­паратов увеличивается до 1 года и более.

Лучистая энергия (ультрафиолет и ионизирующее излучение) непосредственно действует за нуклеиновые кислоты в клетке, вызывая смертельные мутации, или приводит к образованию сво­бодах радикалов, вызывающих инактивацию ферментных систем. Солнечный свет, особенно его коротковолновая часть спектра, оказывает выраженный бактерицидный эффект. УФЛ используют в медицине для обработки операционных, родильных домов и отделений, асептических помеще­ний аптек, в бактериологических лабораториях. Для этих целей устанавливают бактерицидные об­лучатели с длиной волны 260-300 ям. Ионизирующее излучение используют для стерилизации.

Ультразвук вызывает гибель микроорганизмов: в клетке образуются кавитационные полости с резкими перепадами разреженного и избыточного давления, что приводит к разрушению клетки. Этот метод используют для получения компонентов микробной клетки, обеззараживания некоторых жидких препаратов, питьевой воды, молока, соков.

Температура ниже 0°С не оказывает губительного действия, однако микробы прекращают рост и размножение. Некоторые вирусы сохраняются при - 27С°С. В медицине лекарственное сы­рье, многие лекарственные и биологические препараты хранят при температуре от 0°С до + 10°С (температура бытового холодильника) Высокие температуры более губительны для микробов, однако разные виды могут обладать неодинаковой чувствительностью. Так, менингококки гибнут уже при комнатной температуре, возбудитель сифилиса - при +40°С, возбудитель дизентерии - при +60°С, бруцеллы - при 100°С. Споры бактерий погибают лишь через 2-5 часов кипячения.

Стерилизация

Стерилизация - полное обеспложивание объектов, при котором уничтожаются все формы микроорганизмов (вегетативные и споры). Для стерилизации применяют физические и химические методы. Выбор метода определяется видом стерилизующего материала, который после стерилиза­ции должен сохранять свои основные свойства (форму, эластичность, активность и др.). Физиче­ские методы - действие высокой температуры, ионизирующего излучения, фильтрование через коллоидные фильтры.

Методы тепловой стерилизации

Метод стерилизации

Аппаратура

Режим: температура, время, давление

Стерилизуемый материал

однократные методы

прокаливание

спиртовка, газовая горелка

до красного каления

бактериологические петли, мелкий инструментарий

горячим воздухом

воздушный стерили­затор

1800С, 60 минут, (160°С, 150 минут)

стеклянная посуда, пипетки, вата, тальк, вазелиновое масло, шприцы, хир. инструменты

паром под давлени­ем

паровой стерилизатор (автоклав)


1200С, 45 минут, давление 1 атм, (132°С, 20 минут давление 2 атм)

простые пит. среды (ПБ, ПА), заразный материал, белье, халаты, хирургический инструментарии, посуда, резиновые перчатки, некоторые лекарства

многократные методы

текучим паром

паровой стерилизатор с открытым выпускным краном

1000С, 3 дня по 1 часу каждый день

ПЖ, молоко, среды и лекарства с углеводородами, некоторые лекарства

тиндализация

водяная баня с терморегулятором

56-580С, 5 дней:1 день – 2 часа, остальные дни по 1 часу

белковые жидкости (питательные среды, содержа­щие белок)

Многократные методы - это дробная стерилизация объектов, которые могут быть питатель­ным субстратом для микробов (в промежутках между стерилизацией объект оставляли при комнатной температуре для прорастания спор). Образовавшиеся вегетативные формы микроорганизмов убиваются.

Контроль процесса стерилизации осуществляют несколькими методами:

  1. по показаниям приборов (манометров, термометров, таймеров);

  2. с использованием физико-химических тестов (вместе со стерилизуемым материалом в ап­парат закладывают ампулы с кристаллами веществ или специальные бумажные термохимические индикаторы; при нужной температуре вещества расплавляются, а индикаторы меняют цвет);

  3. биологические тесты (в аппарат помещают флакончики с салфетками, пропитанными взве­сью термостойкого спорообразующего микроба, и после стерилизации их инкубируют в ПБ, который не должен мутнеть).

Ионизирующее излучение это наиболее перспективный метод, т.к. возможна полная автоматизация всех процессов. Стерилизацию проводят в товарной упаковке, что обеспечивает длительность сохранения материала стерильным. Установка представляет собой бетонную камеру толщиной 2 метра, с надежной защитой от радионуклидов. После обработки материал контролируется на остаточную радиоактивность. Этим способом стерилизуют хирургический инструментарий, изделия из пластмассы, вакцины, лечебные сыворотки, многие лекарства!

Фильтрование. Используют фильтры из коллодия, диаметр пор которых меньше размеров вирусов. Этот метод применяют на химико-фармацевтических заводах при изготовлении вакцин, иммунных сывороток, растворов антибиотиков, бактериофагов. Фильтрование через бактериаль­ные фильтры (из каолина, асбеста, нитроцеллюлозы) не является стерилизацией в полном смысле, т.к. у этих фильтров более крупные поры. Через них могут проходить вирусы и фильтрующиеся формы бактерий.

Химические методы:

  1. 6% раствор перекиси водорода с поверхностно-активными веществами (ПАВ), экспозиция 1-3 часа. Стерилизуют хирургический инструментарий, пластмассы;

  2. 1% раствор бета - пропиолактона, экспозиция 1-4 часа. Стерилизуют пластмассы, аппараты искусственного кровообращения, "искусственная почка".

Газовая стерилизация. Используют окись этилена или смесь окиси этилена с бромистым ме­тилом, экспозиция 6-24 часа. Стерилизуют оптику, радиоэлектронное оборудование. В некоторых случаях используют совместное воздействие физических и химических факторов.

Дезинфекция

Дезинфекция - комплекс мероприятий, направленных на уничтожение в объектах конкретных патогенных микробов. После дезинфекции могут сохраняться непатогенные микробы. В медицине применяют физические и химические методы дезинфекции.

  1. Физические методы: 1) механические (вытряхивание, проветривание, влажная уборка, стирка с мылом); 2) действие высокой температуры (прокаливание утюгом, кипячение, пастериза­ция); 3) УФО (облучение бактерицидными лампами).

  2. Химические методы - применяют в различных концентрациях следующие дезинфицирую­щие вещества: I) хлорсодержащие препараты (хлорная известь, хлорамин Б, гипохлорит кальция, хлоргексидин и др.); 2) окислители (перекись водорода, перманганат калия); 3) фенолы (карболо­вая кислота, лизол); 4) йод и йодофоры (йод + ПАВ); 5) соли тяжёлых металлов (сулема, диоцид, мертиолят); ПАВ (сульфанол); 7) четвертичные аммонийные соединения (роккал); 8) 70% эта­нол; 9) формалин; 10) красители (бриллиантовый, зеленый); II) кислоты (салициловая, борная и др.).

Механизм дезинфекции различен: механическое удаление; коагуляция белков при нагрева­нии; хлорсодержащие препараты и формалин взаимодействуют с аминогруппами белков, окисли­тели - с сульфгидрильными группами; фенолы повреждает клеточную стенку и нарушают процес­сы дыхания, соли тяжелых металлов образуют альбуминаты белков, ПАВ изменяют заряд клеточных мембран, четвертичные аммонийные соединения нарушают процессы дыхания, краси­тели взаимодействуют с нуклеиновыми кислотами и т.д.

Асептика - система профилактических мероприятий, направленных на предотвращение по­падания в рану, лекарственные препараты микроорганизмов. Она включает: I) стерилизацию инст­рументов, приборов, материалов; 2) специальную обработку рук перед асептичной работой; соблюдение определенных правил и приёмов работы (стерильный халат, маска, перчатки, исключение разговоров и т.п.); 4) осуществление специальных санитарно-противоэпидеческих и гигиенических мероприятии (правильная вентиляция, влажная уборка с применением дезинфицирующих средств, облучение бактерицидными лампами).

Антисептика - комплекс мероприятий , направленных на уничтожение микробов, попавших в рану, лекарственный препарат или другой объект. Применяют антисептику: I) механическую, например, удаление из раны инфицированных или нежизнеспособных тканей при обработке раны; 2) физическую (наложение гигроскопических повязок, применение гипертонических растворов, способствующих оттоку раневого, отделяемого в повязку, сухого тепла, УФС. лазера и т.д. 3) химическую (применяют химические вещества, обладающие бактерицидными или бактериостатическим действием при минимальном органотропном действии, например хлоргексидин; в лекарственные препараты вносят борную кислоту, мертиолят и др.); 4) биологическую (применение анти­биотиков, бактериофагов, иммуноглобулинов, средств, стимулирующих защитные силы организ­ма).

Пастеризация - однократное кратковременное прогревание при температуре ниже 80°С, частичное обеспложивание продуктов только от болезнетворных бактерий. Как и кипячение, пастеризация не является методом стерилизации. После пастеризации сохраняются споры и вегетативные формы, поэтому пастеризованный продукт (молоко, соки и т.д.) хранят в холодильнике.
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   15

перейти в каталог файлов


связь с админом