Главная страница
qrcode

Лекции по Патологической Анатомии. Общий курс.... Лекции по общей патологической анатомии


НазваниеЛекции по общей патологической анатомии
Родительский файлLektsii po Patologicheskoy Anatomii Obschiy kurs.zip
АнкорЛекции по Патологической Анатомии. Общий курс..
Дата19.03.2008
Размер2.08 Mb.
Формат файлаpdf
Имя файлаЛекции по Патологической Анатомии. Общий курс. М
оригинальный pdf просмотр
ТипЛекции
#3647
страница1 из 25
Каталогid7200815
Полное содержание архива Лекции по Патологической Анатомии. Общий курс...:
1. Лекции по Патологической Анатомии. Общий курс. М.А. Пальцев.pdf
2134.02 Кб.
Лекции по общей патологической анатомии

С этим файлом связано 44 файл(ов). Среди них: Chervi.doc, DYKhATEL_NAYa_SISTEMA.doc, Osteologia.pdf, Lektsii.pdf, Cherepnye_nervy.doc, anatomia_bilety_sobesedovanie.doc, Sosudy_nervy.pdf, VN620037.wma, Otvety_po_biletam_72_var.rar, Bulgakov_Mikhail_Zapiski_yunogo_vracha_-_royallib.doc и ещё 34 файл(а).
Показать все связанные файлы
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   25





















Лекции  по  общей  патологической  анатомии.  Учебное  пособие./ 

Под  ред.  академика  РАН  и  РАМН,  профессора  М.А.Пальцева.  

— М., 2003. — 254 с. 

 

 

 

 

Рекомендуется Учебно-методическим объединением по медицинскому 

и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного 

пособия для студентов медицинских вузов. 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

© ММА им. И.М.Сеченова, 2003 

© Оформление ООО “Издательский дом “Русский врач”, 2003 

ПРЕДИСЛОВИЕ

Издание курса лекций по патологической анатомии, прочи-

танного сотрудниками одноименной кафедры Московской меди-

цинской академии им. И.М.Сеченова, представляется важным 

в качестве дополнительного материала к учебнику М.А.Пальцева

и Н.М.Аничкова, изданного в 2001 г. в издательстве “Медицина”.

Эти лекции помогут студентам в усвоении курса патологической

анатомии, а также молодым лекторам в подборе и обработке лекци-

онного материала.

Курс лекций составлен с учетом программы по патологической

анатомии для студентов медицинских вузов, принятой в 2002 г. 

В конце каждой лекции приводится список рекомендуемых иллюст-

раций.

Авторы полагают, что учебник, руководство к практическим 

занятиям, атлас и курс лекций — тот минимум учебных пособий для

студентов и преподавателей, который необходим для освоения пато-

логической анатомии.

При подготовке настоящего материала авторы учли опыт кафедры

по изданию “Лекций по общей патологической анатомии” и “Лекций

по патологической анатомии болезней” под редакцией В.В.Серова

и М.А.Пальцева (М.: Медицина, 1996) и “Патологическая анатомия.

Курс лекций” под редакцией В.В.Серова и М.А.Пальцева (М.: Меди-

цина, 1998).

Академик РАН и РАМН 

М.А.Пальцев

5

Лекция № 1

ВВЕДЕНИЕ В КУРС ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ.

ЭТАПЫ РАЗВИТИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ АНАТОМИИ.

СОДЕРЖАНИЕ, ЗАДАЧИ, ОБЪЕКТЫ 

И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Термин “патология”, составленный из двух греческих слов, 

означает “наука о болезни”. Дисциплина, которая в настоящее время

обозначается этим термином в большинстве стран, имеет и ряд

других наименований: патологическая анатомия, патоморфология,

морбидная анатомия, анатомическая патология, гистопатология,

хирургическая патология и др. В отечественной медицине принято

называть указанную дисциплину “патологическая анатомия”. 

Патологическая анатомия — научно-прикладная дисциплина, изучаю-

щая патологические процессы и болезни с помощью научного, главным

образом, микроскопического исследования изменений, возникающих 

в клетках и тканях.

Под патологическим процессом понимают любое нарушение

структуры и функции, а болезнь — это сочетание одного или 

нескольких патологических процессов, приводящих к нарушению

нормального состояния и жизнедеятельности организма.

В истории развития патологической анатомии выделяют четыре

периода: анатомический (с древности до начала XIX в.), микроско-

пический (с первой трети XIX в. до 50-х гг. XX в.), ультрамикроско-

пический (после 50-х гг. XIX в.); современный четвертый период

развития патологической анатомии можно охарактеризовать как 

период патологической анатомии живого человека.

Возможность изучения патологических изменений органов 

человеческого тела появилась в XV—XVII вв. благодаря возникнове-

нию и развитию научной анатомии. Наиболее значительную роль 

в создании метода анатомического исследования, описании строения

всех важнейших органов и их взаиморасположения сыграли в середи-

не XVI в. работы А.Везалия, Г.Фаллопия, Р.Коломбо и Б.Евстахия.

Анатомические исследования второй половины XVI—начала

XVII вв. не только укрепили позиции анатомии, но и способствова-

ли появлению интереса к ней у врачей. Значительное влияние на

развитие анатомии в этот период оказали философ Ф.Бэкон и ана-

том У.Гарвей.

В 1676 г. Т.Боне сделал первую попытку на значительном матери-

але (3000 вскрытий) показать существование связи между обнару-

6

женными морфологическими изменениями и клиническими прояв-

лениями болезни.

В XVII в. в Европе появились богатейшие анатомические музеи

(Лейден), в которых были широко представлены патологоанатоми-

ческие препараты.

Важнейшим событием в истории патологической анатомии, 

определившим ее выделение в самостоятельную науку, стало изда-

ние в 1761 г. основного труда Дж.Б.Морганьи “О местоположении 

и причинах болезней, выявленных анатомом”.

В конце XVIII в. были опубликованы многочисленные работы,

построенные на принципе клинико-анатомических сопоставлений,

предложенном Дж.Б.Морганьи.

На рубеже XVIII и XIX вв. во Франции Ж.Корвизар, Р.Лаэннек,

Г.Дюпюитрен, К.Лобштейн, Ж.Буйо, Ж.Крювелье широко внедрили

патологическую анатомию в клиническую практику, а М.К.Биша

указал дальнейший путь ее развития — изучение повреждений на

тканевом уровне. Ученик М.К.Биша Ф.Бруссе создал учение, кото-

рое отвергало существование болезней, не имеющих материального

субстрата. Ж.Крювелье выпустил в 1829—1835 гг. первый в мире

цветной атлас по патологической анатомии.

В середине XIX в. наибольшее влияние на развитие этой отрасли

медицины оказали труды К.Рокитанского, в которых он не только

представил изменения в органах на различных этапах развития забо-

леваний, но и уточнил описание патологических изменений при

многих болезнях. В 1844 г. К.Рокитанский основал в Венском уни-

верситете кафедру патологической анатомии, создал крупнейший 

в мире патологоанатомический музей. С именем К.Рокитанского

связывают окончательное выделение патологической анатомии в са-

мостоятельную научную дисциплину и врачебную специальность.

Переломным моментом в развитии этой дисциплины явилось созда-

ние в 1855 г. Р.Вирховым теории клеточной патологии.

В России первые попытки организации прозекторского дела 

относятся к XVIII в. Они связаны с деятельностью видных организа-

торов здравоохранения — И.Фишера и П.З.Кондоиди. Эти попытки

не дали ощутимых результатов в связи с низким уровнем развития

российской медицины и состоянием медицинского образования,

хотя уже в то время проводились вскрытия с контрольно-диагности-

ческими и исследовательскими целями.

Становление патологической анатомии как научной дисциплины

началось лишь в первой четверти XIX в. и совпало по времени с улуч-

шением преподавания нормальной анатомии в университетах. 

7

Одним из первых анатомов, обращавших внимание студентов на па-

тологические изменения органов во время вскрытия, был Е.О.Мухин.

Впервые вопрос о необходимости включения патологической

анатомии в число обязательных предметов преподавания на меди-

цинском факультете Московского университета был поставлен 

в 1805 г. М.Я.Мудровым в письме к попечителю университета

М.Н.Муравьеву. По предложению Ю.Х.Лодера преподавание пато-

логической анатомии в виде курса при кафедре нормальной анато-

мии было отражено в университетском уставе 1835 г. В соответствии

с этим уставом преподавание самостоятельного курса патологичес-

кой анатомии было начато в 1837 г. проф. Л.С.Севруком на кафедре

нормальной анатомии. Профессора Г.И.Сокольский и А.И.Овер 

начали использовать новейшие патологоанатомические сведения 

в преподавании терапевтических дисциплин, а Ф.И.Иноземцев 

и А.И.Поль — при чтении лекций по курсу хирургии.

В 1841 г. в связи с созданием нового медицинского факультета 

в Киеве Н.И.Пирогов поставил вопрос о необходимости открытия 

кафедры для преподавания патологии в Университете Св. Владимира.

В соответствии с уставом этого университета (1842) было предусмо-

трено открытие кафедры патологической анатомии и патологичес-

кой физиологии, которая начала функционировать в 1845 г. Ее воз-

главил Н.И.Козлов — ученик Н.И.Пирогова.

7 декабря 1845 г. было принято “Дополнительное постановление

о медицинском факультете Императорского Московского универси-

тета”, которое предусматривало создание кафедры патологической

анатомии и патологической физиологии. В 1846 г. профессором этой

кафедры был назначен Ю.Дитрих — адъюнкт факультетской тера-

певтической клиники, которой заведовал А.И.Овер. После смерти

Ю.Дитриха в конкурсе на замещение вакантной должности приня-

ли участие четыре адъюнкта терапевтических клиник Московского

университета — Самсон фон Гиммельштерн, Н.С.Топоров,

А.И.Полунин и К.Я.Млодзиевский. В мае 1849 г. профессором кафе-

дры патологической анатомии и патологической физиологии был

избран А.И.Полунин — адъюнкт госпитальной терапевтической

клиники И.В.Варвинского.

Для современной медицины характерен постоянный поиск наи-

более объективных материальных критериев диагностики и позна-

ния сущности болезни. Среди этих критериев морфологический

приобретает исключительное значение как наиболее достоверный.

Современная патологическая анатомия широко использует до-

стижения других медико-биологических дисциплин, обобщая фак-

8

тические данные биохимических, морфологических, генетических,

патофизиологических и других исследований с целью установления

закономерностей работы того или иного органа и системы при раз-

личных заболеваниях.

Благодаря задачам, которые решает в настоящее время патологи-

ческая анатомия, она занимает особое место среди медицинских

дисциплин. С одной стороны, патологическая анатомия — это теория

медицины, которая, раскрывая материальный субстрат болезни, непо-

средственно служит клинической практике, с другой — это клиничес-

кая морфология для диагноза, дающая материальный субстрат теории

медицины — общей и частной патологии человека (Серов В.В., 1982). 

Под  общей патологией понимают наиболее общие, т.е. свойст-

венные всем болезням закономерности их возникновения, развития

и исходов. Уходя своими корнями в частные проявления различных

болезней и основываясь на этих частностях, общая патология одно-

временно синтезирует их, дает представление о типовых процессах,

характерных для той или иной болезни. Дальнейший прогресс общей

патологии не может быть поставлен в зависимость от развития 

какой-либо одной дисциплины или их группы, так как общая пато-

логия представляет собой концентрированный опыт всех отраслей

медицины, оцененный с широких биологических позиций.

Каждая из современных медицинских и медико-биологичес-

ких дисциплин вносит свою лепту в построение теории медицины.

Биохимия, эндокринология и фармакология раскрывают тонкие 

механизмы процессов жизнедеятельности на молекулярном уровне;

в патологоанатомических исследованиях законы общей патологии

получают морфологическую интерпретацию; патологическая физи-

ология дает их функциональную характеристику; микробиология 

и вирусология являются важнейшими источниками разработки эти-

ологического и иммунологического аспектов общей патологии; 

генетика раскрывает секреты индивидуальности реакций организма

и принципы их внутриклеточного регулирования; клиническая 

медицина завершает оформление законов общей патологии человека

на основе собственного богатейшего опыта и окончательной оценки

получаемых экспериментальных данных под углом зрения психоло-

гических, социальных и других факторов. 

Для современного этапа развития медицины характерно то, что

дисциплины, ранее бывшие преимущественно или даже исключи-

тельно экспериментальными (генетика, иммунология, биохимия,

эндокринология, патологическая физиология и др.), становятся 

в равной мере и клиническими.

9

Быстрое развитие клинической физиологии, клинической мор-

фологии, клинической иммунологии, клинической биохимии 

и фармакологии, медицинской генетики, принципиально новых 

методов рентгенологического исследования, эндоскопии, эхографии

и др. чрезвычайно обогатило знания о фактических деталях и общих

закономерностях развития болезней человека. Все более широкое

использование неинвазивных методов исследования (компьютерная

томография, ультразвуковая диагностика, эндоскопические методы

и др.) позволяет визуально определять локализацию, размеры и даже

в известной степени характер патологического процесса, что по 

существу открывает пути развития прижизненной патологической

анатомии — клинической морфологии, которой посвящен курс част-

ной патологической анатомии.

Сфера применения морфологического анализа в клинике посто-

янно расширяется благодаря все возрастающей хирургической 

активности и успехам медицинской техники, а также в связи с совер-

шенствованием методических возможностей морфологии. Совер-

шенствование медицинских инструментов привело к тому, что прак-

тически не осталось таких областей организма человека, которые

были бы недоступны для врача. При этом особое значение для совер-

шенствования клинической морфологии приобретает эндоскопия,

позволяющая клиницисту заниматься морфологическим изучением

болезни на макроскопическом (органном) уровне. Эндоскопичес-

кие исследования служат и целям биопсии, с помощью которой 

патологоанатом получает материал для морфологического исследо-

вания и становится полноценным участником решения вопросов

диагностики, терапевтической или хирургической тактики и про-

гноза заболевания. Используя материал биопсии, патологоанатом

решает и многие теоретические вопросы патологии. Поэтому био-

птат становится основным объектом исследования при решении

практических и теоретических вопросов патологической анатомии.

Методические возможности современной морфологии удовле-

творяют стремления патологоанатома ко все возрастающей точности

морфологического анализа нарушенных процессов жизнедеятельно-

сти и все более полной и точной функциональной оценке структур-

ных изменений. Современные методические возможности морфоло-

гии огромны. Они позволяют изучать патологические процессы 

и болезни на уровне организма, системы органов, органа, ткани,

клетки, клеточной органеллы и макромолекулы. Это макроскопи-

ческие и светооптические (микроскопические), электронно-мик-

роскопические, цито- и гистохимические, иммуногистохимические

10

и авторадиографические методы. Наблюдается тенденция к ком-

плексированию ряда традиционных методов морфологического 

исследования, в результате чего возникли электронно-микроскопи-

ческая гистохимия, электронно-микроскопическая иммуноцитохи-

мия, электронно-микроскопическая авторадиография, существенно

расширившие возможности патологоанатома в диагностике и позна-

нии сущности болезней.

Наряду с качественной оценкой наблюдаемых процессов и явле-

ний при использовании новейших методов морфологического анали-

за существует возможность количественной оценки.  Морфометрия 

дала в руки исследователей возможности применения электронной

техники и математики для суждения о достоверности результатов 

и правомочности трактовки выявленных закономерностей.

С помощью современных методов исследования патологоана-

том может обнаружить не только морфологические изменения,

свойственные развернутой картине того или иного заболевания, но

и начальные изменения при болезнях, клинические проявления ко-

торых еще отсутствуют в силу состоятельности компенсаторно-

приспособительных процессов (Саркисов Д.С., 1988). Следователь-

но, начальные изменения (доклинический период болезни)

опережают их ранние клинические проявления (клинический пери-

од болезни). Поэтому главным ориентиром в диагностике началь-

ных стадий развития заболевания служат морфологические измене-

ния клеток и тканей.

Патологическая анатомия, располагая современными техничес-

кими и методическими возможностями, призвана решать задачи

как клинико-диагностического, так и научно-исследовательского

характера.

Несмотря на то, что в последние годы во всех странах число

вскрытий неуклонно снижается, патологоанатомическое исследова-

ние остается одним из главных методов научного познания болезни.

С его помощью осуществляется экспертиза правильности диагноза 

и лечения, устанавливаются причины смерти. В связи с этим вскры-

тие трупа как завершающий этап диагностики необходимо не только

клиницисту и патологоанатому, но и медицинскому статистику 

и организатору здравоохранения. Этот метод является базой науч-

ных исследований, преподавания фундаментальных и прикладных

медицинских дисциплин, школой врача любой специальности.

Анализ результатов вскрытия играет важную роль в решении ряда

крупных научно-практических проблем, например проблемы

изменчивости, или патоморфоза, болезней. 

11

Объекты, изучаемые патологоанатомом, можно разделить на три

группы: 1) трупный материал, 2) субстраты, полученные от больных

при их жизни (органы, ткани и их части, клетки и их части, продук-

ты секреции, жидкости) и 3) экспериментальный материал.

Трупный материал. Традиционно органы и ткани трупов умер-

ших являются предметом изучения в ходе патологоанатомических

вскрытий (аутопсий, секций) лиц, умерших от болезней. Случаи

смерти, произошедшей не от болезней, а в результате преступлений,

катастроф, несчастных случаев или неясных причин, исследуют 

судебные медики.

Трупный материал изучают на анатомическом и гистологичес-

ком уровнях. Реже используются рентгенологические, микробио-

логические и биохимические методы. В патологоанатомическое

отделение вместе с покойником доставляется история болезни 

и вся имеющаяся медицинская документация. Перед вскрытием

патологоанатом обязан все это изучить, а затем пригласить на 

аутопсию лечащих врачей. Клиницисты должны удостовериться 

в тех находках, которые подтверждают или опровергают их пред-

ставления о процессах и изменениях, произошедших в организме

при жизни больного. Результаты аутопсии патологоанатом зано-

сит в протокол вскрытия, а причины смерти больного указывает 

в свидетельстве о смерти, которое затем выдает родственникам 

покойного. 

Вскрытие. Основная цель аутопсии — установление окончатель-

ного диагноза и причин смерти больного. Оцениваются также пра-

вильность или ошибочность клинического диагноза, эффективность

лечения. Существуют критерии оценки расхождений клинического

и патологоанатомического диагнозов, а также классификация при-

чин расхождений. Другая цель вскрытия — взаимное обогащение

научно-практического опыта клиницистов и патологоанатомов.

Значение секционной работы патологоанатома состоит не только 

в контроле за качеством лечебно-диагностической деятельности

клиницистов (контроль этот сложен и осуществляется не только 

патологонатомами), но и в накоплении статистических и научно-

практических данных о болезнях и патологических процессах.

Если секционная работа организована высокопрофессионально

и адекватно оснащена методически, то выполнение ее в полном объ-

еме обходится очень дорого. Это и стало одной из причин значитель-

ного сокращения числа госпитальных вскрытий в ряде промышленно

развитых стран. Тенденция к сокращению количества вскрытий 

наметилась и в России.

12

Материал, взятый при жизни больного. Гораздо больший объем 

в работе патологоанатома занимает микроскопическое изучение мате-

риала, полученного с диагностической целью при жизни больного. 

Чаще всего такой материал поступает от оперирующих клиницистов:

хирургов, гинекологов, урологов, оториноларингологов, офтальмоло-

гов и др. Диагностическая роль патологоанатома здесь велика, и его 

заключение нередко определяет формулировку клинического диагноза.

Гистологическое исследование. Этому исследованию подвергаются

операционный и биопсийный материалы. От патологоанатома требуется

гистологическое подтверждение (уточнение) диагноза. В обоих слу-

чаях важна немедленная фиксация удаленных тканей. Даже не очень

долгое содержание удаленных кусочков или субстратов на воздухе, 

в воде или солевом растворе может привести к необратимым, искус-

ственно вызванным изменениям в материале, которые затруднят или

исключат постановку правильного гистологического диагноза. 

Из фиксированного материала острой бритвой вырезают кусочки

не более 1 см диаметром, затем их закладывают в специальные кас-

сеты и помещают в автоматы для гистологической проводки.

Гистологические срезы толщиной 5—10 микрон наклеивают на

предметные стекла, депарафинируют, окрашивают тем или иным

способом, затем заключают в оптически прозрачные среды под 

покровное стекло.

При срочных биопсиях, проводимых нередко во время обширных

хирургических вмешательств, с целью быстрого получения гистоло-

гического диагноза ткань замораживают и нарезают на криостате

или замораживающем микротоме. Замороженные срезы обычно

толще парафиновых, но они пригодны для предварительной диагно-

стики. Криостат и замораживающий микротом применяют для 

сохранения спирторастворимых и некоторых других компонентов

ткани, которые важны для диагностики (например, жир).

Для обычной диагностики широко используют универсальную

гистологическую окраску срезов гематоксилином и эозином. Тинкто-

риальные, т.е. красящие свойства гематоксилина реализуются в сла-

бощелочной среде, и структуры, окрашенные этим красителем в си-

ний или темно-синий цвет, принято называть базофильными. К ним

относятся ядра клеток, отложения солей извести и колонии бактерий.

Слабую базофилию могут давать некоторые виды слизи. Эозин, напро-

тив, при рН менее 7 окрашивает так называемые оксифильные компо-

ненты в розово-красный или красный цвет. К ним относятся цитоплазма

клеток, волокна, эритроциты, белковые массы и большинство видов

слизи. Очень часто применяют окраску пикрофуксином по ван Гизону,

13

элективно, т.е. избирательно, окрашивающую в красный цвет колла-

геновые волокна соединительной ткани, тогда как прочие структуры

становятся желтыми или зеленовато-желтыми. Существует также

множество гистологических окрасок для выявления тех или иных

компонентов ткани или патологических субстратов. 

Цитологическое исследование. Его проводят по мазкам, сделан-

ным из содержимого полых или трубчатых органов, а также по пре-

паратам-отпечаткам, пунктатам и аспиратам (аспирационным пунк-

татам, отсасываемым шприцом). Мазки нередко изготавливают из

материала смывов со стенок органов, что позволяет захватить клет-

ки, находящиеся в процессе естественного или патологического слу-

щивания (десквамации, эксфолиации), например, с шейки матки.

Более активным вмешательством является соскоб со стенок органов.

Если материал соскоба обилен, то его обрабатывают с помощью 

гистологических методик. В частности, так поступают с диагности-

ческими соскобами эндометрия. При скудных соскобах материал

идет в цитологическую обработку. Нередко препараты изготавливают

из мокроты, слизи, тканевых цугов и осадков в жидкостях. Осадки

можно получить после центрифугирования взвесей.

Цитологический материал фиксируют, обычно, прямо на пред-

метном стекле, часто во время окраски. Наиболее популярны окраски:

азур-эозином (его тинкториальные свойства близки к гематоксилину

и эозину) или бисмарк-брауном по Папаниколау.

Иммуногистохимическое исследование. При некоторых патологи-

ческих состояниях, особенно опухолях, бывает трудно и даже невоз-

можно с помощью гисто- или цитологических окрасок определить

тип ткани или ее происхождение (гистогенез). Между тем, такая ве-

рификация имеет важное значение для диагностики и прогнозирова-

ния. Поэтому используют различные дополнительные методические

подходы. Одним из них является иммуногистохимический метод.

При нем на гисто- или цитологические препараты наносят растворы

с антителами к искомым антигенам: опухолевым, вирусным, микроб-

ным, аутоантигенам и др. Антигены при обычных гистологических

окрасках тканей не видны. Антитела в сыворотках несут на себе метку:

либо флуорохром, т.е. краситель, светящийся в темном поле (иначе 

говоря, дающий флуоресценцию), либо красящий фермент. Если

искомый антиген есть в исследуемых тканях или клетках, то возник-

ший комплекс антиген-антитело плюс маркер точно укажут его лока-

лизацию, количество, помогут изучить некоторые свойства.

И м м у н о ф л у о р е с ц е н ц и ю   чаще всего используют при изу-

чении срезов, приготовленных в криостате или на замораживающем

14

микротоме, а также при исследовании цитологических препаратов.

Применяются сыворотки с антителами, так называемые антисыво-

ротки, конъюгированные чаще всего с таким надежным флуорохро-

мом, как флуоресцеин-изотиоцианат. Наиболее популярен непря-

мой метод, позволяющий выявить антигены с помощью двойной

реакции с антителами. 

Еще более распространен  и м м у н о п е р о к с и д а з н ы й   м е т о д .

Антитела красящей сыворотки несут не флуорохром, а фермент —

пероксидазу хрена, реже другой энзим, например, щелочную фосфа-

тазу. Существует несколько вариантов указанного метода. Наиболее

часто используются два из них: пероксидазно-антипероксидазный

(ПАП-метод), и метод авидин-биотинового комплекса (ABC-метод).

При  ПАП-методе  цепь промежуточных антител, связывающих

энзим с антигеном, несколько длиннее, чем при непрямом иммуно-

флуоресцентном методе. Энзимное, т.е. пероксидазное антитело

связывается с первичным антителом, уже находящемся на антигене,

посредством еще одного антитела-мостика.

При авидин-биотиновом методе первичное антитело, находящееся

на антигене и меченное биотином, связывается с ПАП-комплексом

через промежуточное антитело, меченное авидином. Оба белка —

авидин и биотин резко повышают качество реакции, поэтому ABC-

метод считается более чувствительным.

Для иммуногистохимических реакций используют 2 типа анти-

тел: поли- и моноклональные. Первые получают из антисывороток

иммунизированных кроликов. Моноклональные антитела получают

в культуре тканей или из асцитической жидкости, полученной из

брюшной полости лабораторных животных. Моноклональные анти-

тела абсолютно специфичны по отношению к антигену и не дают 

перекрестной реактивности.

Популярность иммунопероксидазного метода связана, в основ-

ном, с его простотой и доступностью. Существует множество ком-

мерческих наборов (kits) сывороток к различным антигенам, специ-

фичным для тканей или опухолей и получившим название маркеров.

Выгоды применения иммунопероксидазных реакций объясняются

высокой чувствительностью (по сравнению с иммунофлуоресценцией

ПАП-метод чувствительнее в 1000 раз, а ABC-метод — в 10000 раз),

относительной стойкостью, возможностью применения некоторых

реакций на депарафинированных срезах, прошедших и фиксацию, 

и проводку через спирты,

Методы молекулярной биологии. В хорошо оснащенных патологоа-

натомических отделениях и научно-исследовательских институтах

15

для прижизненной диагностики применяют методы молекулярной

биологии:  проточную цитометрию и технику гибридизации in situ

т.е. на месте, на гистологическом срезе. Первый метод необходим для

количественного анализа содержания ДНК в клетках опухолей. С этой

целью исследуемый кусочек нефиксированной ткани с помощью фер-

ментов подвергают дезагрегации, т.е. разъединению и размельчению

до отдельных клеток. Затем в специальной установке поток суспензии

изолированных клеток толщиной в 1 клетку, окруженный обволаки-

вающей жидкостью, проходит через считывающий лазерный пучок.

С помощью гибридизации in situ достигается совмещение генети-

ческого материала (фрагментов ДНК, генов) in vitro на основе ком-

плементарности, т.е. взаимного соответствия, например, пуриновых

или пиримидиновых оснований у нуклеиновых кислот. Этот метод

применяется, в основном, в трех областях патологии: для идентифи-

кации по геному микробов или вирусов, находящихся в тканях или

жидкостях; для изучения генома при его врожденных нарушениях;

при диагностике опухолей, в частности, для распознавания вирус-

ных онкогенов. Есть множество модификаций метода.

Очень популярна полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая

осуществляется прямо на гистологических срезах. Вначале проводят

денатурацию исследуемой ДНК, т.е. разъединение двух ее спираль-

ных нитей и получение одной из них в изолированном состоянии.

Затем наслаивают другую, инородную нить (чаще РНК), меченную

флуорохромом или ПАП-комплексом. Молекулярная структура

этой нити, т.е. последовательность ее оснований, заведомо известна.

Если имеется комплементарность с исследуемой нитью, то красящая

реакция на гистологическом препарате положительна, а строение

этой нити становится известным.

Исследование хромосом. Во многих современных патологоанато-

мических отделениях и научно-исследовательских институтах про-

водят хромосомный анализ, позволяющий определять отклонения 

в генетическом аппарате (геноме) клеток, имеющие врожденный

или приобретенный характер.

Этот анализ приобретает особое значение при распознавании 

и изучении опухолей, различные варианты которых сопровождаются

вполне специфическими маркерными перестройками или аберраци-

ями хромосом. Для этого прижизненно взятую ткань культивируют,

т.е. выращивают на искусственных средах. Такой метод культивиро-

вания позволяет путем пересевов и отбора клеток добиться получе-

ния культуры клеток одного тканевого типа и даже одного клона,

т.е. линии, происходящей от одной стволовой клетки.

16

Основные этапы хромосомного анализа на примере исследования

лимфоцитов крови состоят в следующем. В культуру гепаринизиро-

ванной крови (гепарин — антикоагулянт) добавляют фитогемагглюти-

нин, стимулируя Т-лимфоциты к трансформации в бласты (менее зре-

лые формы, способные к митозу и делению). Через 2—3 сут инкубации

в культуру вносят колхицин для задержки митозов на стадии метафазы

у делящихся лимфоцитов. Именно в метафазе хромосомы как бы рас-

пластываются, что удобно для изучения. Затем клетки переносят на

предметное стекло, фиксируют и окрашивают, чаще всего по методу

Гимзы. В результате в каждой паре хромосом выявляются светлые

(неокрашенные) и темные (окрашенные) полосы (bands), поэтому 

метод называют бэндингом хромосом. Расположение полос в нормаль-

ном кариотипе (наборе хромосом) высокоспецифично для каждой 

пары хромосом, и диаграммы (карты) бэндинга в норме хорошо известны.

Хромосомный анализ относится к экономически дорогим мето-

дам и потому применяется нечасто.

Электронная микроскопия. В ходе диагностических исследований

на материале, взятом при жизни больного, нередко используется эле-

ктронная микроскопия: трансмиссионная (в проходящем пучке, 

подобно светооптической микроскопии) и сканирующая (снимаю-

щая рельеф поверхности). Первую применяют чаще, особенно для

изучения в ультратонких срезах ткани деталей строения клеток, 

выявления микробов, вирусов, отложений иммунных комплексов 

и др. Ультраструктурное исследование стоит очень дорого, однако

нередко применяется с диагностической и научной целью.

Экспериментальный материал. Исследуя ткани, взятые при жизни

или после смерти больного человека, патологоанатом наблюдает изме-

нения в момент изъятия ткани. Что было до того и могло быть после —

остается неизвестным. Эксперимент с достаточным количеством лабо-

раторных животных (белых мышей, белых крыс, морских свинок, кро-

ликов, собак, обезьян и др.) позволяет моделировать и изучать болезни

и патологические процессы на любом этапе их развития.
  1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   25

перейти в каталог файлов


связь с админом